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二氧化氯消毒剂在蚕桑业上的应用试验报告

二氧化氯消毒剂在蚕桑业上的应用试验报告

试验单位:安徽省农业科学院蚕桑研究所

二○○七年十一月

一、 概况

       减少家蚕疾病的发生是确保蚕桑生产安全高产的重要条件之一,目前主要依靠消毒的方法来实现这一目的。在我国的蚕桑生产中,常用的消毒剂为四类:一是以漂白粉为代表的氯制剂类,二是以福尔马林为代表的甲醛制剂类,三是表面活性剂类,四是以盐酸、石灰为代表的酸碱类。国内在蚕药研?#21697;?#38754;,相继研制出用于蚕体、蚕座消毒的聚甲醛散、防病1号、防病2号、蚕座净等;用于?#40092;?#34453;具消毒的漂白粉、甲醛溶液、各种氯、醛制剂等。其特点为:以化学药剂为主,不注重生态环保型,对环境污染严重,使用不便。未来蚕用消毒剂的发展趋势是必须具备使用简易安全、?#26412;?#24191;谱、无腐蚀性、高效低毒、生态环保型等优点。因此,开展新的蚕用消毒剂?#30446;?#21457;对我国蚕业?#30446;沙中?#21457;展具有相当的创?#24405;?#20540;。

稳定二氧化氯是一种多功能工业与民用化工产品,1985年由美国百合兴公司首先研制成功,经美国农业部(EPU)和美国环保局(EPA)确认为食品消毒剂,美国食品与药物管理局(FDA)批准为食品添加剂。日本、澳大利亚及西欧各国相继立法,将其确定为替代氯系消毒剂的第四代安全消毒剂和食品添加剂。它不仅是一种广谱、高效、无毒的消毒剂。而?#19968;?#26159;优良的水处理剂、食品保鲜、漂白剂、防腐剂和除臭剂。于是迅速在水处理行业、食品行业、医疗保健行业、造纸行业、畜牧养?#25215;?#19994;、日化行业得到广泛的应用,但是在蚕桑生产上的应用还不多见。

二、 试验报告

(一) 试验目的

       研究二氧化氯消毒剂在蚕桑业上的应用,包括该药剂对家蚕病原微生物的消毒效果、对家蚕的生理影响以及对桑叶的影响等。

(二) 试验药剂

       二氧化氯消毒剂

(三) 试验内容

       本试验共分四部分的内容,分别为:二氧化氯消毒剂对家蚕病原微生物消毒作用试验;二氧化氯对家蚕饲养的影响试验;二氧化氯叶面消毒对桑叶的药害试验;二氧化氯添食对预防家蚕病毒病的试验。

 

1.二氧化氯消毒剂对家蚕病原微生物消毒作用

1.1 供试病原菌

       真菌和细菌:白僵菌、绿僵菌、曲霉菌、黑胸败血菌、Bt 取新鲜菌用无菌水加少?#23458;?#28201;-80分别配成浓度为2×107、2×107、1×107、4×108、5×108个分生孢子或菌/mL的菌悬液。

       病毒:核型多角体(NPV)和质型多角体(CPV)稀释成2.5×107、2×107个多角体/ml的悬液。

       家蚕微粒子(N.b):将?#24405;?#20195;的N.b配成1.5×108个/mL的悬液。

1.2 试验方法

1.2.1 对病原真菌、细菌的杀灭效果

       将二氧化氯液作用于白僵菌、绿僵菌、曲霉菌、黑胸败血菌及Bt的菌悬液30min后,取0.1mL均匀涂抹于培养基上,每个处理重复3次,26℃条件下培养24d,观察菌落生长情况。每处理设3个重复。

1.2.2 对病毒的杀灭效果

       将配好浓度的NPV和CPV均匀涂于2cm×4cm载玻片上,?#31185;?.1mL,阴干后用不同浓度的消毒剂浸渍消毒30min,消毒结束后,将玻片?#20204;?#27700;轻轻漂洗2次,除去药液,然后每玻片加0.1mL无菌水,用玻棒刮下载玻片上的病毒给蚕添食。设毒对照和空白对照,空白对照区用无菌水代替消毒剂同等处理。每处理设3个重复,每个重复20头蚕。

1.2.3 对微粒子的杀灭效果

       取0.1mLN.b加不同浓度的消毒剂0.9ml处理10min后,3000r/min离心,弃清液,加蒸馏水再离心一次,最终取N.b沉淀加蒸馏水0.1mL,摇匀后涂抹再一定面积的桑叶上,让二龄蚕全部食下,设毒对照和空白对照,空白对照区以无菌水代替消毒剂进?#22411;?#26679;处理。每处理设3个重复,每个重复20头蚕。

1.3 灭菌效果的判断

       真菌和细菌经消毒处理后,接种培养基,以菌落生长情况作为判断标准。微粒子和多角体病毒经过消毒处理后,均匀涂抹在桑叶上,供一定数量的?#40092;?#19979;,饲养一?#38382;?#38388;后,调查发病率,并以发病率计算消毒效果,以消毒效果作为判断依据。

1.3 结果与分析

1.3.1 对真菌、细菌的杀灭效果

       从表1可以看出,二氧化氯对白僵、绿僵、曲霉、黑胸败血菌以及Bt作用30min后,随着二氧化氯含量的升高灭菌效果在提高,在二氧化氯含量为100mg/L?#20445;?#38500;曲霉菌外,几种病原菌均没有生长。由此实验结果可知,“益康”二氧化氯对家蚕病原真菌和细菌有很好的杀灭效果。

    表1 对病原真菌、细菌的杀灭效果

 

 

真 菌

细 菌

白僵菌

绿僵菌

曲霉

黑胸败血菌

Bt

二氧化氯含量

(mg/L)

25

++

++

++

++

++

50

+

+

++

++

++                         

75

+

+

+

+

+

100

-

-

+

-

-

 

125

-

-

-

-

-

空对

-

-

-

-

-

毒对

+++

+++

+++

+++

+++

注:“-”表示无菌生长;“+”表示菌极少量生长;“++”表示菌少量生长;“+++”表示菌大量生长。

1.3.2 对多角体病毒及微粒子的杀灭效果

表2 对多角体病毒及微粒子的杀灭效果

 

 

NPV

CPV

N.b

发病率

消毒效果

发病率

消毒效果

发病率

消毒效果

二氧化氯含量

(mg/L)

25

50

75

100

16.67

83.33

45.00

55.00

51.67

48.33

8.33

91.67

33.33

66.67                      

0

100

0

100

16.67

83.33

0

100

0

100

0

100

0

100

 

125

0

100

0

100

0

100

空对

0

-

0

-

0

-

毒对

100

-

100

-

100

-

 

2 二氧化氯对家蚕饲养的影响

2.1 供试蚕品种

菁松、皓月

2.2 试验方法

       取1龄起蚕,按含二氧化氯有效含量为25mg/L,50 mg/L,75 mg/L,100 mg/L,125 mg/L5个梯?#30830;?#21035;对桑叶喷洒喂食处理,共5个处理,每处理3组重复,每组100头蚕。饲育至上簇采茧。以喷清水饲养家蚕为对照。处理技术标准一致。调查眠蚕体重、龄期经过、熟蚕体重及茧质。对75mg/L的浓度处理区制种,制?#36136;?#20998;别以菁松和皓月对交制普通杂交种。制种结束后,每区随机抽取200粒茧进行单蛾制种,调查制种成绩。蚕种经浸酸处理打破滞育后,调查孵化?#30465;?/p>

2.3 结果与分析

2.3.1 蚕期结果

表1  二氧化氯喷洒桑叶添食对菁松的生长发育、茧质的影响(2007.10 合肥)

 

 

喷洒桑叶添食

清水对照

25 mg/L

50 mg/L

75 mg/L

100 mg/L

125 mg/L

1眠体重(g/头)

0.011

0.011

0.011

0.011

0.011

0.011

2眠体重(g/头)

0.037

0.037

0.038

0.039

0.038

0.037

3眠体重(g/头)

0.205

0.215

0.204

0.203

0.198

0.200

4眠体重(g/头)

1.108

1.108

1.116

1.116

1.123

1.115

熟蚕体重(g/头)

4.635

4.640

4.641

4.640

4.651

4.638

1龄经过(d:h)

3:12

3:12

3:13

3:12

3:12

3:12

2龄经过(d:h)

2:11

2:11

2:11

2:11

2:11

2:11

3龄经过(d:h)

3:10

3:10

3:10

3:10

3:10

3:10

4龄经过(d:h)

4:08

4:08

4:08

4:08

4:08

4:08

5龄经过(d:h)

7:15

7:15

7:15

7:15

7:15

7:15

全茧量(g)

1.810

1.804

1.796

1.808

1.798

1.818

茧层量(g)

0.419

0.397

0.414

0.407

0.431

0.421

茧层率(%)

23.02

22.98

23.06

21.59

20.39

23.14

       从表1数据可以看出,二氧化氯喷洒桑叶添食对家蚕的生长发育及茧质均无不?#21152;?#21709;。说明二氧化氯消毒剂是一种对家蚕安全的药剂。

2.3.2 制种结果

       ?#26432;?可知,2个原种正反交的杂种1代,其各项指标均为试验区的略优于对照区。平均化蛾?#30465;?#20135;卵数、良卵率和实用孵化?#23454;?#35797;验区的与对照区均无显著差异。试验结果表明使用二氧化氯消毒对蚕种种质无不良的影响。

表3 对蚕种种质的影响

 

 

 

化蛾率/%

平均单蛾

产卵/粒

平均单蛾卵重/g

良卵率/%

实用

孵化率/%

菁松×皓月

对照区

89.51

372

0.18

98.13

93.46

试验区

90.15

406

0.19

98.52

93.87

皓月×菁松

对照区

88.68

358

0.16

98.24

93.42

试验区

89.26

397

0.18

98.65

93.78

3 二氧化氯叶面消毒对桑叶的药害试验

3.1 试验方法

3.1.1 桑园喷洒试验 

       在安徽农业科学院蚕桑研究所桑园进行。喷药时间10月8~15日进行,试验在无风的傍晚和中午12: 00实施。中午桑园平均温度为35℃,傍晚平均温度为28 ℃。喷药后定时观察桑树枝条和叶片变化情况。

       试验药?#21495;?#24230;?#21495;?#21046;二氧化氯浓度为50、75、100、150、200、400、600、800、1 000 mg/L,以清水作对照。

设区:在桑园内选择长势良好、树型、枝条数和叶片相对一致的植株用作试验,每个浓度作为1个处理,每处理设2个重复,以清水对照。

       药剂喷洒方法:将配制好的二氧化氯溶液注入喷壶内,对桑叶底、面进行均?#21462;?#20805;分的喷洒。

3.1.2 桑叶离体浸渍试验 

       样品采集:上午9: 00前在桑园选取长势旺盛、生长一致的植株,采摘浅绿色桑叶即顶芽下的第4~5片叶,装入保鲜袋备用。

       药剂?#21495;渲品?#27861;同“1. 2. 1”,以原液进行0、25、50、100 mg/L的梯?#35748;?#37322;。

       处理方法:把配制好的二氧化氯溶液置于烧杯中,分别放入待测桑叶,使其完全浸湿2min,取出沥去多余药液,置于瓷盘中定时观察叶片变化情况。试验时室内温度为25℃。

3.1.3 二氧化氯对桑叶营养成分的影响试验

       选取长势、叶片一致的多?#31181;?#26705;树2株作为2个重复,分别在同一植株上选取长势相近的6根枝条,将6根枝条随机分作3个处理,分别用50、100 mg/L二氧化氯药液和清水按要求小心均匀喷洒。待药液干后,采摘相同叶位(从顶?#23458;?#19979;第4~7片叶)的叶片作检测,测定桑叶的蛋白质、糖、脂肪等含量。

3.2 结果与分析

3.2.1 桑园喷洒不同浓度药液后对桑叶的药害观察

       多数常用的消毒剂在一定浓度下对桑叶会产生药害作用,其程?#28909;?#20915;于药液的浓?#21462;?#26412;试验结果?#20801;荊?#20108;氧化氯溶液在0~150mg/L?#27573;?#20869;对桑叶表征无明显影响,叶片未出现卷缩、变黄或叶肉变薄、硬化等现象,并且药?#21495;?#21040;叶面后,并不会立即风干或挥发。

       经过24h后观察,喷过药液的桑叶表征与清水对照区亦无明显差异。中午12: 00与傍晚进行的试验结果基本一致。表明50~150mg/L二氧化氯溶液在不同时间用作桑园叶面消毒,对桑叶无明显药害影响。进一步提高药?#21495;?#24230;进行测试的结果如表1所示:用200 mg/L以下质量浓度的二氧化氯溶?#21495;?#24067;桑树,不会对桑叶产生不?#21152;?#21709;;400mg/L二氧化氯溶液对桑叶有轻度药害,但可以?#25351;矗?#32780;800、1 000mg/L以上药液对桑叶的药害显著,且是不可复性的,其表现主要为叶片被氧化而褪绿。

表1 二氧化氯溶液处理对桑叶的影响

 

浓度

mg/l

叶面特征

24h

48h

50

-

-

75

-

-

100

-

-

150

-

-

200

-

-

400

+

-

600

+

+

800

++

++

1000

+++

+++

清水CK

-

-

“ - ”示叶片正常,无异常表征;“ + ”?#23616;?#26465;顶?#22235;?#21494;出现萎缩,叶面从边缘向中间卷褶;“ + + ”示卷曲比“ + ”严重,?#23545;当?#35088;色;“ + + + ”示全部嫩叶褪绿变褐色。

3.2.2 桑叶浸渍药液后的药害观察

       用浸渍法消毒桑叶的结果表明,用100 mg/L二氧化氯溶液浸泡离体桑叶,桑叶没有类似所出现的失水、发蔫、发黑等外观异常。但同桑园喷洒药液比较,有一定程度的失水,对照也有一定程度的失水,可能与桑叶离体后在室温下放置的?#21248;?#22833;水有关。

3.2.3 不同浓度药液对桑叶营养成分的影响

       水分、碳水化合物、蛋白质和脂肪是桑叶的主要营养成分。根据测定结果,对各营养成分含量的分析,本试验表明50、100mg/L二氧化氯溶液没有产生负面影响。

表2 不同处理桑叶的营养成分含量

 

处理    

水分

可溶性总糖

可溶性单糖

?#20540;?#30333;

脂肪

50mg/L Cl02

75.45%

17.78%

3.52%

18.23%

4.08%

100mg/L ClO2

74.98%

18.04%

4.16%

18.44%

6.40%

76.12%

18.68%

4.35%

18.58%

6.48%

4 二氧化氯添食对预防家蚕病毒病的试验报告

4.1 供试蚕品种

       菁松×皓月

4.2 试验方法

       1~2龄为常规育,三龄饷食后第2次给叶前分蚕,分两个添食处理组,一个对照组,每个处理内分三个重复小区,每区300头蚕。

       药物添食方法:三、四、五龄饷食后第二次给叶时开始添食。对照区全龄不添食。

       药品的配?#21697;?#27861;:二氧化氯配制成50、75、100mg/L的浓度,喷于桑叶上添食。

4.3 结果与分析

       家蚕在添食处理后,蚕期死?#40092;?#19978;蔟死?#40092;?#27515;笼率均明显低于对照区。

表1生命力调查

 

处理

蚕期死?#40092;?#22836;)

上蔟死?#40092;?#22836;)

实收蚕茧数(粒)

死笼率

(%)

虫蛹统一生命率(%)

二氧化氯

(mg/L)

50

2.1

2.3

291

5.1

90.1

75

1.7

2.1

293

5.4

89.8

100

1.5

2.0

296

4.7

90.7

CK

6

8

290

9.3

87.67

三、 试验结果

       通过对二氧化氯的各项试验结果,可以得出:

1)经过100mg/L浓度的“益康”二氧化氯消毒30min后对家蚕常见病原菌(曲霉菌除外)的杀灭作用可?#28304;?#21040;很好的效果,尤其对微粒子的杀灭效果较为突出,在50mg/L就可?#28304;?#21040;较好的杀灭效果。

2)用低浓度的“益康”二氧化氯对家蚕体喷和对桑叶叶面进行消毒然后添食家蚕, 对家蚕生理发育无不?#21152;?#21709;。

3)当药剂质量浓度在200mg/L以下?#20445;?#23545;桑叶叶质没有不?#21152;?#21709;;以100mg/L以下质量浓度药液对桑叶作浸渍消毒时未发现叶片外观出现异常。表明100mg/L以下浓度的“益康”二氧化氯用作桑树叶面消毒剂,对桑叶叶质没有不?#21152;?#21709;,可以用于桑园和桑叶消毒。

4)二氧化氯添食处理后,明显降低了家蚕病毒病的发生,对家蚕病毒病的预防具有一定的作用。

       因此,二氧化氯对家蚕主要病原菌有强杀灭作用,但对家蚕安全、无毒,同?#20445;?#35813;药剂对桑叶也无不?#21152;?#21709;,可以用于叶面、养蚕环境以及蚕体、蚕座消毒,生产上应用浓度为100mg/L,杀灭时间30min,符合生产要求。二氧化氯药剂具有无?#30899;ぁ?#24191;谱、高效、无毒、安全等优点,是一种理想的养蚕消毒剂。

 

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